Free Radicals in Biological Systems and Bioanalytical

O Grupo de Estudos da Obesidade (GEO/Unifesp) convida adolescentes de 15 a 19 anos na faixa de peso entre 90 e 130 kg para tratamento com equipe interdisciplinar de 20 semanas, por meio do uso de WhatsApp®, e-mail e aplicativos de celulares Android®. O jovem precisa morar em São Paulo ou região metropolitana e ter disponibilidade de vir ao Campus São Paulo da Unifesp em períodos previamente determinados pelos pesquisadores. O tratamento ocorrerá entre fevereiro e junho de 2018. Os interessados devem entrar em contato pelo e-mail [email protected]. Vagas limitadas. Mais informações sobre voluntários em https://goo.gl/nymdZ7.

Tese a ser defendida em 21 de outubro em nosso grupo

Letícia Dias Lima Jedlicka

“Estudos Proteômicos e Metabolômicos em Animais Frente à Exposição à 2,3-Butanodiona”

Tese apresentada à Universidade Federal de São Paulo-Escola Paulista de Medicina, para obtenção do Título acadêmico de Doutor em Ciências.

Orientador: Prof. Dr. Nilson Antonio de Assunção

Resumo

A 2,3-butanodiona é amplamente utilizada como flavorizante na indústria alimentícia e como aromatizante pela indústria de ci****os eletrônicos, mas também é produzido pelos organismos através da oxidação de açúcares, proteínas e lipídios. A exposição a 2,3-butanodiona esta associada a diversos tipos de doenças, principalmente as pulmonares.
Neste trabalho administramos 540 mg/Kg/dia de 2,3-butanodiona por gavagem em ratos Wistar e também foi administramos 2,3-butanodiona na água de beber à camundongos C57/Bl em diferentes concentrações (0, 100, 300 e 500 mg/Kg/dia), simulando a ingestão humana.
Verif**amos modif**ações no tecido pulmonar de ratos Wistar, ocasionadas devido à ingestão de 2,3-butanodiona, analisando as alterações histológicas, as células inflamatórias (neutrófilos e prostaglandinas E2) e analisando o perfil proteico através de análises de espectroscopia de massas, análise das modif**ações pós traducionais, de redes de interações ente proteínas e de ontologia dos genes. Utilizamos ferramentas de análises proteômicas para verif**ar se houve aumento na acetilação de proteínas e confirmamos estas análises através do Western blotting. Desta forma, podemos inferir se a reação entre o peroxinitrito e a 2,3-butanodiona produz a acetilação via radicalar in vivo. E avaliar como estas alterações influenciam na expressão proteômica do tecido pulmonar de ratos Wistar. Pois, a acetilação radicalar não controlada pode provocar a alteração da função das proteínas e erros no processamento da informação genética, ocasionando mutações de proteínas e doenças.

Tese de Doutorado sob minha orientação:
Estudo do Perfil de Neurotransmissores em Portadores da Sindrome de Cri Du Chat por Eletroforese Capilar.
Aluna: Talita Mendes
A síndrome de Cri Du Chat (CDC) é uma doença rara, resultante de uma deleção do braço curto do cromossomo 5p com características marcantes como choro agudo semelhante ao miado de gato, microcefalia, micrognatia, atraso no desenvolvimento cognitivo e alterações comportamentais. Vários estudos relacionam as alterações neurológicas e comportamentais encontradas em doenças como Autismo, Síndrome de Tourrent e Desordem de Hartup semelhantes às relatadas em portadores de CDC, com alterações genéticas em uma mesma família de genes, encontrada no cromossomo 5p, responsáveis pelo transporte de neurotransmissores que desempenham papel importante como mensageiros das informações neurológicas. Buscando elucidas estas possíveis relações, neste projeto iremos analisar os neurotransmissores e seus aminoácidos precursores relacionados com algumas das características clínicas comportamentais dos portadores de CDC, para isso estamos desenvolvendo um método analítico que seja possível a identif**ação e quantif**ação de todas estas substâncias nas amostras de urina e sangue (plasma) dos portadores e assim avaliar e comparar com os controles (familiares) obtendo um perfil bioquímico destes portadores que facilitará uma maior compreensão do comportamento encontrado nos portadores. Em seguida, com uma técnica chamada PCR iremos verif**ar nas amostras de saliva a presença ou ausência dos genes citados anteriormente para confirmar sua possível relação com os neurotransmissores desses portadores e finalizaremos com um levantamento do perfil farmacoterapêutico dos portadores, avaliando as terapias utilizadas por cada portador para amenizar as alterações encontradas no perfil bioquímico.
Prof Nilson Antonio de Assuncao, Ph.D
Msc Talita Mendes, Farmacêutica, Doutoranda em Medicina

O que é a síndrome de Cri Du Chat?

É uma doença genética e rara, em que as crianças portadoras desta doença nascem com um choro semelhante ao miado de um gato, além de outras alterações como: a cabeça pequena, dificuldades em falar, andar entre outras dificuldades.

O que causa esta síndrome?

Está doença é originada durante a formação do bebê, quando as células estão se dividindo e então o cromossomo 5 que está dentro do núcleo de cada célula e que contém a informação genética, é quebrado (braço curto), tornando o cromossomo incompleto.

Por que estudar a Síndrome Cri Du Chat?

Por que os cromossomos contêm toda a informação genética de uma pessoa, e estes mesmos cromossomos são responsáveis por varias funções do nosso corpo, como por exemplo: a cor do cabelo, a cor da pele, as características do nosso rosto e, além disto, também são responsáveis por coordenar as funções de movimentação, atenção, sensibilidades e etc. Portanto, se um cromossomo do nosso corpo está incompleto, consequentemente vai gerar danos no nosso organismo. E estes danos são ao nível de proteínas e metabólitos que não conseguimos enxergar, somente sentir seus efeitos, que é o que observamos na síndrome Cri Du Chat.

O que são os metabólitos?

Bom, o metabólito é como uma unidade de tijolo, onde se juntarmos 10 tijolos teremos um bloco de tijolos, e se juntarmos 10 blocos de tijolos teremos uma parede. Da mesma forma são as proteínas, que são formadas pelo o conjunto de metabólitos.
Só que para a formação das proteínas é necessária que tenha um código, que vai informar qual a posição de cada metabólito, para formar uma proteína. Este código é fornecido pelo os cromossomos, ai que estar a importância de estudar os metabólitos

Por quê?
Por que os metabólitos exercem a função de formar as proteínas, participam das reações do nosso metabolismo para a produção de energia, desintoxicação, memória, aprendizagem e etc.
Então, se avaliar os metabólitos do nosso organismo teremos mais chances de identif**ar as relações do motivo da quebra do cromossomo e também os porque dos características clinicas de pessoas portadoras da Síndrome Cri Du Chat. E com base nestes resultados provavelmente poderemos intervir nos efeitos causados pela a síndrome Cri Du Chat, com a aplicação de remédios ou uma suplementação, para poder nivelar os níveis dos metabólitos ausentes, e consequentemente causar uma melhor qualidade de vida de pessoas afetadas por esta doença genética.

Alguns resultados

Até agora o nosso grupo Radicais Livres em Sistemas Biológicos e Bioanalítica, liderado pelo o professor Dr. Nilson Antonio Assunção, traçamos um perfil de alterações biológicas que são resultados da Síndrome Cri Du Chat. Estas alterações analisadas envolvem deficiências na produção de energia celular que é o combustível para executamos as funções biológicas, observamos também que a síndrome Cri Du Chat pode causar um processo de envelhecimento precocemente, identif**amos o porquê algum paNilcientes Cri Du Chat tem uma massa muscular reduzida, ou seja, são mais magros, devido a deficiência de alguns metabólitos. Avaliamos o porquê as pessoas afetadas por esta síndrome têm uma mudança de humor e isto é causado processo aumentado de síntese de um neurotrasmissor. E também foram identif**ados alterações de alguns metabólitos que estão no processo de síntese das bases da vida (DNA).
Todos estes resultados ainda são prematuros, mas já podemos ser direcionados para as análises mais complexas, como explicadas anteriormente: tentar descobrir o como ocorre à quebra do cromossomo, como diminuir os efeitos causados pela a síndrome Cri Du Chat, como melhorar a qualidade de vida das pessoas CDC, além disto, proporcionar um direcionamento para os familiares que tenham uma pessoa portadora desta síndrome.

Prof Nilson Antonio Assuncao, Ph.D
Danielle Zildeana Souza Furtado, Doutoranda em Medicina Translacional

http://www.kpbs.org

KPBS San Diego Public Radio & TV: News, Arts & Culture

Uma Abordagem Bioanalítica em Portadores de Microcefalia Oriundos da Exposição ao Virus Zika

Coordenador: Nilson Antonio de Assuncao, Ph.D

O número de pessoas infectadas Zika Virus tem alcançado proporções logaritíma a partir 2007 ao redor do mundo. Tem seu foco em países tropicais, porém devido a forma de contato que pode ocorrer por via sexual e após meses de exposição ao mesmo tem chamado a atenção de autoridade ligadas a saúde pública. Atualmente o Brasil é líder dos casos. A grande diferenças de outras febres e similares causadas por vírus e com vetor mosquitos é a probabilidade em torno de 10% das mães grávidas as quais teve exposição ao vírus quer por picadas de mosquitos ou via sexual com pessoas infectadas pelo o vírus, geram filhos com microcefalia.
A microcefalia, consiste no nascimento de uma bebe com a redução da caixa craniana causando sérios danos morfológicos e neurológicos afetando de forma não reversível. Todavia o que pode ser feito ao longo do desenvolvimento de uma pessoas a qual nasce com este evento como a microcefalia é uma redução destes efeitos ao longo do desenvolvimento da criança principalmente nos primeiro anos. Pouco sabemos da fisiopatologia de uma criança que nasce com microcefalia oriunda das mais diferentes origens portanto compreender a nível molecular será de grande valia no sentido de minimizar este danos, por que uma vez conhecida terapias poderão ser implementadas.
Este projeto propõe um detalhamento em nível molecular das pessoas as quais nasceram com microcefalia oriundas de exposição ao vírus Zika. Objetivo do entendimento proteômico lipodômico/metabolômico é que conhecido o metabolismo e a bioquímica em geral, poderá fornecer informações especif**as para o controle das alterações de portadores com microcefalias em geral. Se conhecidos estas alterações metabólicas logo ao nascer será mais produtivo o controle quer por alimentação ou farmacológica destes pacientes. Porém para esta intervenção devemos conhecer a bioquímica que estes pacientes possuir para produzir ferramentas que minimizam os efeitos deletérios na vida destes milhares de pacientes que nasceram ou nascerão com microcefalia.
Frente a este cenário iremos avaliar o perfil (proteômico/metabolômico/ lipidômico) de um conjunto de duzentos e oitenta recém nascidos (140 meninos e 140 meninas) cuja a microcefalia foi causada pela exposição da mãe ao Zika vírus. Serão 100 portadores e 40 não portadores em cada gênero. Para isso basearemos em diagnóstico fornecido pelo Hospital São ou de outros Hospitais Universitários (UFS, UFG).
Para a análise proteômica, lipidômica e metabolômica, as amostras serão tratadas, e em seguida analisadas nos seguintes equipamentos: eletroforese capilar (CE) e Cromatografia líquida acoplada a espectrometria de massas (HPLC-MS/MS). HPLC-MicroOTOF, ESI-nanoLC/MS/MS e MALDI-nanoLC/MS/MS. O conjunto de metabolitos e proteínas encontrados na população com microcefalia serão validados pelo emprego de anticorpos apropriados. Assim, buscaremos um entendimento mais profundo do processo patológico (proteômica/lipidômica/metabolômica), podendo conduzir a biomarcadores que podem ser úteis ao entendimento deste evento (microcefalia), e visando assim uma melhora do tratamento, através novas abordagens terapêuticas futuras.

Laboratório de Espectrometria de Massas Aplicada à Biomoléculas (LEMBio) - EPM/UNIFESP
Rua Pedro de Toledo, 781, Décimo Quinto andar, Vila Clementino, CEP 04039-032, São Paulo, SP
Laboratório de Radicais Livres em Sistemas Biológicos - ICAQF/UNIFESP
Rua Prof Artur Riedel, 275, CEP 09972-270, Diadema, SP.

Atualmente em meu grupo de pesquisa, como muitos de vocês sabem tem acontecido, com muito esforço e falta de recursos, mas sempre vamos arrumando uma maneira de contornar este problema, teses sobre a busca de mecanismos moleculares em pessoas que nascem com a deleção na região do cromossomo 5, conhecida com Cri Du Chat .
Como já informei houve uma dissertação já defendida onde analisamos 18 portadores e 18 irmãos. A Dissertação da Aluna Danielle Furtado, que atualmente faz doutorado na Medicina, sob minha orientação, no mesmo tema. Danielle Zildeana Furtado é biomédica.
Temos a Farmacêutica Talita Mendess, também aluna de doutorado na Medicina, sob minha orientação, que esta implementando um método analítico para analisar Perfil de Neurotransmissores nos portadores.
E temos as tese de doutorados so biomédico Giuseppe Gianini e da Farmacêutica Bernadete de Faria que esta em fase inicial do estudo envolvendo as diferenças em proteínas entre os portadores.
Nas próximas semanas irei explicar o que cada projeto com meta, o que temos de novidade, onde estes resultados podem levar no entendimento desta desordem.

http://lpi.oregonstate.edu/feature-story/xanthohumol-lab-tests-lowers-cholesterol-blood-sugar-and-weight-gain

Xanthohumol in lab tests lowers cholesterol, blood sugar and weight gain | Linus Pauling... CORVALLIS, Ore. – A recent study at Oregon State University has identified specific intake levels of xanthohumol, a natural flavonoid found in hops, that signif**antly improved some of the underlying markers of metabolic syndrome in laboratory animals and also reduced weight gain.

Caras familias, iniciamos a discussão para um livro que auxilie principalmente novas famílias Cri Du Chat

Summary

Vitamin D can be synthesized in the skin upon exposure to sunlight and is then metabolized in the liver and kidney to the metabolically active form called 1,25-dihydroxyvitamin D. Through binding to the vitamin D receptor (VDR), 1,25-dihydroxyvitamin D can regulate the expression of hundreds of genes involved in skeletal and other biological functions. (More information)
Vitamin D is essential for maintenance of bone mineralization through the regulation of calcium and phosphorus homeostasis. Vitamin D also exhibits many non-skeletal effects, particularly on the immune, endocrine, and cardiovascular systems. (More information)
Vitamin D is important for normal bone development and maintenance. Severe vitamin D deficiency causes rickets in children and osteomalacia in adults. (More information)
Secondary hyperthyroidism due to vitamin D insufficiency can increase bone breakdown and precipitate osteoporosis. Randomized clinical trials indicate that high doses of supplemental vitamin D can reduce the risk of falls and fractures in older individuals. (More information)
Vitamin D can regulate cell differentiation and growth by binding to the vitamin D receptor found in most body cells. Observational studies have reported associations between low sun exposure, poor vitamin D status, and increased risk of developing colorectal and breast cancer. Randomized clinical trials are needed to evaluate whether cancer prevention may benefit from vitamin D supplementation. (More information)
Various observational studies have reported an association between vitamin D status and the susceptibility or severity of autoimmune diseases, including type 1 diabetes mellitus, multiple sclerosis, rheumatoid arthritis, and systemic lupus erythematosus. (More information)
Current evidence from observational studies suggests an inverse relationship between circulating vitamin D concentrations and risk of type 2 diabetes mellitus. It is not yet known whether correcting vitamin D deficiency in individuals with glucose intolerance can decrease the risk of progression to type 2 diabetes. (More information)
Randomized clinical trials are currently investigating whether vitamin D supplementation can limit cognitive deterioration and disease progression in subjects with neurodegenerative disease. (More information)
Vitamin D insufficiency in pregnant women may be associated with several adverse effects for the mother and newborn. Safety and benefits of vitamin D supplementation during pregnancy both need to be evaluated in clinical trials. (More information)
Recent preliminary studies have shown that vitamin D supplementation may offer promising improvements in the management of atopic dermatitis (eczema) and Crohn's disease. (More information)
Vitamin D is a fat-soluble vitamin that regulates calcium homeostasis and is vital for bone health (1). While it can also be obtained from dietary sources or supplements, vitamin D3 (cholecalciferol) is synthesized in the human skin from 7-dehydrocholesterol upon exposure to ultraviolet-B (UVB) radiation from sunlight (see the separate article on Vitamin D and Skin Health). Vitamin D2 (ergocalciferol) is a vitamin D analog photosynthesized in plants, mushrooms, and yeasts; vitamin D2 is also sometimes used in vitamin D food fortif**ation (2). When vitamin D3 in skin is inadequate due to insufficient exposure to UVB radiation, oral intake of vitamin D is necessary to meet vitamin D requirements.

Leticia e Danielle preparando para fazer uma coleta.

Atualmente temos em desenvolvimento no nosso grupo um projeto de pesquisa que estudamos o efeito do 2,3 butenodieno o simplesmente Diacetil, quando exposto em em animais. Este composto é um aditivo largamente utilizado na alimentação humana e promove o gosto de manteiga nos alimentos, principalmente na pipoca de microondas, sabor de manteiga, bolacha e etc.
Os resultados não são animadores para saúde humana.

Este grupo de pesquisa teve como origem no laboratório que levava o mesmo nome no Instituto de Química da USP, onde foi liderado por muito anos pelo professor Etelvino José Henriques Bechara.